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檢測知識
NY/T 1286-2007 花生黃曲霉毒素B1的測定 高效液相色譜法 標準內容
日期:2023-01-05 10:23:54作者:百檢網 人氣:0

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1 范圍

本標準規定了采用高效液相色譜法測定花生黃曲霉毒素B1含量的方法。

本標準適用于花生中黃曲霉毒素B1的測定。

本方法檢出限為1.0μg/kg。

2 規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本標準。

GB 5491 糧食、油料檢驗扦樣、分樣法

GB 6682 實驗室用水規定(GB 6682-1992,eqv ISO 3696-1987)

3 原理

樣品中黃曲霉毒素B1經提取濃縮、衍生化,反相C18柱分離后,在激發波長365mm,熒光波長440nm檢測,外標法定量,計算樣品黃曲霉毒素B1含量。

4 試劑

下列試劑除注明外均為分析純,水為GB 6682 規定的二級水。

4.1 甲醇,色譜純。

4.2 乙腈,色譜純。

4.3 甲醇溶液(含4%氯化鈉),稱取4g氯化鈉(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL水的混合溶液。

4.4 三氟乙酸。

4.5 石油醚(60℃~90℃)。

4.6 三氯甲烷。

4.7 黃曲霉毒素B1標準儲備液,10mg/L。

5 儀器設備

5.1 天平,感量±1mg。

5.2 切片機。

5.3 粉碎機。

5.4 旋渦混合器。

5.5 超聲波清洗器,功率不低于50W。

5.6 干熱氮吹儀,控溫精度50℃±2℃。

5.7 中速定性濾紙。

5.8 烘箱,控溫精度50℃±2℃。

5.9 0.45μm有機相濾膜。

5.10 Nova-pak C18色譜柱(3.9mm×150mm)。

5.11 液相色譜儀(帶熒光檢測器)。

6 取樣

按GB 5491 執行。

7 試樣的制備

樣品中的水分及揮發物含量超過10%時,在45℃左右的條件下通風干燥。將干燥的花生樣品在切片機中切片至0.5mm左右,再經粉碎機粉碎,過0.42mm篩。

8 分析步驟

8.1 提取

稱取20g(*至10mg)樣品,置于250mL具塞錐形瓶中,加60mL甲醇溶液(4.3)。50℃±2℃水浴超聲提取5min(每隔1min取出旋渦混合1次),過雙層中速定性濾紙(5.7),收集濾液于小燒杯中取濾液10mL于試管a中,加入5mL石油醚(4.5),旋渦混合30s,靜置2min,待分層后,棄上層,取下層溶液5mL于試管b中,加入5mL三氯甲烷(4.6)至試管b中,旋渦混合10s,靜置2min,取出上層于試管c中,再加入5mL三氯甲烷(4.6)至試管b中,旋渦混合10s,靜置2min,取上層。合并兩次提取液于試管c中。

8.2 柱前衍生

將提取液置于干熱氮吹儀(5.6)50℃恒溫吹干,加入200μL衍生試劑(4.4),蓋好塞子,旋渦混合30s,50℃烘箱中衍生5min,置于干熱氮吹儀(5.6)50℃恒溫吹干,用1mL流動相溶解,過有機相濾膜(5.9),濾液用液相色譜分析。

8.3 色譜分析

8.3.1 取黃曲霉毒素B1標準儲備液(4.7),用甲醇(4.1)稀釋至20μg/L、40μg/L、80μg/L、160μg/L、320μg/L標準使用液連同樣品依次進樣,進行液相色譜檢測,建立工作曲線。

8.3.2 色譜條件:流動相:乙腈+甲醇+水=13+12+75,流速:0.8mL/min,進樣量10μL,柱溫30℃,檢測器:EX:365nm,FM:440nm

9 結果計算

試樣中黃曲霉毒素B1含量以質量分數W計單位以微克每千克表示(g/kg),按公式(1)計算:

W=m1×V1xD/V2×1000x1000/m (1)

式中:

m1——從工作曲線上計算出進樣體積樣品中黃曲霉毒素B1質量,單位為微克(pg);

V1——加入流動相體積的數值,單位為毫升(mL);

V2——進樣體積,單位為微升(L);

D——樣液的總稀釋倍數;

m——試樣質量,單位為克(g)。

計算結果保留小數點后一位。

…………

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第三方檢測辦理流程:確認項目方案>報價>百檢安排寄樣實驗室>檢測樣品>出具檢測報告

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